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elisa操作好能手都需要知道这些

发表时间：2024-01-25

Elisa实验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

咱们就来谈谈ELISA试剂盒需把握的关键有哪些技巧？

1.小心汲取试剂并严格遵守给定的孵育时刻和温度。请注意在汲取标本/规范品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时刻距离假如太大，将会导致不同的 “预孵育"时刻，然后明显地影响到测量值的准确性及重复性。

2.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。一切试剂瓶盖须盖紧以避免蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致呈现错误的结果。

3.浓洗涤液会有盐分出，稀释时可在水浴中加温助溶。

4.试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。

5.刚敞开的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对试验结果造成任何影响。

6.一切的样品都应管理好，依照规则的程序处理样品和检测设备。

我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的，如血浆、血清、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等等，不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步，下面简单介绍一下细胞裂解液样本及组织匀浆样本的正确采集、处理方法。

细胞裂解液：

1.吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2.收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

3.加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

4.将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。

5.4℃10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

组织匀浆液：

1.将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。

2.将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分。

3.将组织按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）。

4.吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

注意：保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。